منصة الرسائل والاطاريح: ترافق التناظر الجيني للأفامين والبيروكسي ريدوكسين 4 مع حالة مضادات الأكسدة و اعتلالية الكلية السكرية

الخلاصة

لقد ازداد انتشار مرض السكري من نوع الثاني T2DM في العراق ، والنفقات الطبية لمثل هذا الارتفاع في الانتشار كبير. يتميز DN بزيادة في معدل إفراز الالبومين في الادرار ، وكذلك وظائف الكلى غير الطبيعية كما يتضح من الكرياتينين في المصل وانخفاض معدل الترشيح الكبيبي . يُعد اعتلال الكلية السكري ، المعروف أيضًا باسم التهاب كبيبات الكلى بين الشعيرات الدموية أو "متلازمة كيميلستيل ويلسون أو تصلب الكبيبات العقدي السكري" متلازمات إكلينيكية تتميز بالبيلة الزلالية (> 300 مجم / يوم أو> 200 ميكروغرام / دقيقة) اثبتت على الأقل مرتين (ثلاثة - ستة) أشهر ، انخفاض دائم ولا رجعة فيه في "معدل الترشيح الكبيبي (GFR) ، وارتفاع ضغط الدم الشرياني". "اعتلال الكلية السكري" (DN) هو مضاعفات مزمنة لجميع مرض السكري من نوع الاول T1DM (نقص الأنسولين سبب تحطم خلايا بيتا) ، و T2DM (مقاومة الأنسولين أو نقص إفراز الأنسولين). الأفامين هو بروتين سكري 87 كيلو دالتون (GPC87) للثدييات مشفر بواسطة الكروموسوم 4 في البشر الذي يحتوي على 15 % من الكربوهيدرات و 55 % من الأحماض الأمينية ويعتبر مشابهًا للألبومين. يتم التعبير عنه بشكل أساسي في الكبد ويتم إفرازه في الدورة الدموية حيث يعمل كبروتين ناقل "كارهة للماء" ، ويرتبط فيتامين E بالأفامين بناءً على خصائص الارتباط الكيميائي المحتملة. يُعتقد أن الأفامين يعمل كمضاد للأكسدة وبالتالي يحمي الدماغ من مستويات عالية من الإجهاد التأكسدي. البيروكسي ردوكسينات هي عائلة من البروتينات المضادة للأكسدة ، محمية في مجموعة متنوعة من الكائنات الحية من حقيقيات النوى إلى بدائيات النوى ، الحجم الجزيئي للأنزيمات المضادة للأكسدة حوالي 20 إلى 30 كيلو دالتون ، وهي تعادل الوظيفة البيولوجية لمنع الكائن الحي من الإجهاد التأكسدي ، وبالتالي تعمل على تنظيم الإشارة داخل الخلايا ، يمكن تقسيم عضو عائلة Prx إلى ستة أنواع ؛ الشكل الوحيد لـ Prx4 الموجود في المصل. لاحظنا وجود تغييرات من Prx4 في مرض السكري. الأهداف: تم قياس نشاط البيروكسي ريدوكسين 4 ونشاط أفامين. ودراسة ارتباط جين بيروكسي ريدوكسين 4 وجين أفامين مع DN ومقارنته بأفراد مجموعة التحكم. وتم تطوير طريقة دقيقة جديدة لتقييم نشاط الكتاليز بطريقة جديدة ، الكتاليز هو إنزيم حيوي مضاد للأكسدة يفكك H2O2 الى الماء وجزيئة الأكسجين. وكذلك تم تطوير طريقة دقيقة جديدة لتقييم نشاط البيروكسي ريدوكسين بطريقة جديدة. استخدم في هذا البروتوكول أزيد الصوديوم (NaN3) للقضاء على تداخل الكتاليز وتجنب استخدام تركيزات عالية من حامض قوي لتثبيط تفاعل Prx. الطريقة: تكونت الدراسة من 200 مريض (100 مريض مصاب بالنوع T2DM غير مصاب باعتلال الكلية و 100 مريض مصاب بالنوع T2DM مع اعتلال الكلية) و 100 من أفراد التحكم الأصحاء. القياسات البيوكيميائية تشمل بيروكسيريدوكسين 4 ، أفامين ، نشاط بيروكسي ريدوكسين ، المالون داي الديهايد ، مضادات الأكسدة الكلية ، الأكسدة الكلية ، نشاط الكتاليز في المصل وفيتامين E . وتم تطوير طريقة دقيقة جديدة لتقييم نشاط الكتاليز و يعتمد على تفكك بيروكسيد الهيدروجين ، يقيس الاختبار المطوَّر التفاعل بين كاشف هيدروكينون / كبريتات الأنيلينيوم / موليبدات الأمونيوم وبيروكسيد الهيدروجين غير المتفاعل ، مما ينتج عنه مركب كينون أرجواني (امتصاصية عند طول موجي 550 نانومتر) . تطوير طريقة دقيقة جديدة لتقييم نشاط البيروكسيريدوكسين ، تم تقدير أنشطة البيروكسي روكسين من خلال احتضان العينات بتركيزات مناسبة من (DTT) وبيروكسيد الهيدروجين (H2O2) أو (t-BOOH) ، كمادة اساس . تم منع التفاعل الأنزيمي بعد الحضانة باستخدام كاشف يحتوي على كبريتات الحديدوز الأمونيوم (AFS) و أمينوساليسيليك (ASA). نتيجة لذلك ، سوف يتفاعل البيروكسيد المتبقي مع الكاشف لتكوين مركب أمينوساليسيلات بني اللون (امتصاصية عند طول موجي 425 نانومتر). تم إجراء التنميط الجيني لـ rs 35233345 Afamin Gene ، rs 564561 peroxiredoxin 4 تعدد الأشكال الجيني بواسطة تسلسلات PCR. النتائج: لاحظنا تقدير البيانات البيوكيميائية إلى وجود فروق ذات دلالة إحصائية في PRX4 (0.014) بين (G1 ،G2 ) (0.01) بين (G1، G3) ( (0.973بين (G2، G3)، أفامين (0.01) بين (G1، G1) ( 0.01) (G2، G3) ( 0.799) بين (G2، G3)، فيتامين E (0.01) بين (G1، (0.01) ( G2 بين (G1، (G3 (0.801) بين (G2) ، (G3 ، PRX باستخدام H2O2 كمادة اساس ل Prx (0.001) بين (G1 ،( G2 ( (0.001 بين (G1 ، (G3 0.171) ) بين (G2 ، (G3 ، PRX باستخدام t-BOOH كمادة اساس ل Prx (0.001) بين (G1، (0.001) (G بين (G1، (0.888) (G3 بين (G2، (G3 ، TAO (0.001) بين (G1، (0.001) (G2 بين (G1، G3) (0.544) بين (G2، (G3 ، TOS (0.030) بين (G1، (G2 ( (0.000 بين (G1، (0.103) (G3 بين (G2، G3) ، Catalase (0.001) بين (G1، (0.001) (G2 بين ( G1، (G3 (0.788) بين (G2، (G3، MDA (0.001) بين (G1، (G2 (0.001) بين (G1، (0.713) (G3 بين (G2، G3) في المرضى المصابين بالنوع T2DM مع وبدون اعتلال الكلية بالمقارنة مع تلك الموجودة في مجموعة التحكم . و أوضحت النتائج أنه لا توجد ارتباطات ذات دلالة إحصائية بين تعدد الأشكال AA و AG و GG (rs 35233345 G> A) Afamin تعدد الأشكال ، كما أوضحت النتائج أنه لا توجد ارتباطات معنوية وغير معنوية بين تعدد الأشكال CC و GC و GG للبيروكسي ريدوكسين.4 (rs 564561 G> C) تعدد الأشكال. في الاستنتاج ، يرتبط اعتلال الكلية السكري بارتفاع نسبة الأفامين (0.01) بين (G1 ، (G2 ، 0.01)) بين (G1 ، (G3 ، ((0.799 بين (G2 ، G3) ، وارتفاع PRX4 (0.014) بين (G1 ، (0.013) (G2بين (G1، (G3 (0.973) بين (G2، G3). ارتبط DN بمستويات مرتفعة من ROS و MDA. انخفاض مستويات TAO ، DN المرتبط بإنقاص CAT وفيتامين E. لتقييم نشاط الكتاليز ، تم إثبات النتائج أن هذا الاختبار يمكن استخدامه للبحث العلمي والتطبيقات الصحية الروتينية لأنه غير مكلف وبسيط ودقيق وسريع. هذه الطريقة مناسبة للاستخدام في مختبرات علم الأمراض السريرية لأنها بسيطة وتنتج نتائج دقيقة وقابلة للتكرار. ولتقييم نشاط البيروكسي ريدوكسين ، وجد معامل الارتباط للمقارنة (r> 0.99) بين كل من طريقة FAS وطريقة ferrithiocyanate.