منصة الرسائل والاطاريح: الخصائص المناعية لمتعدد السكريات المحفظي ضد المكورات العنقودية ذهبية المقاومة للمثسلين في الجرذان

الخلاصة

تهدف الدراسة الحالية الى التحري عن الخواص المناعية والفعالية الوقائية للسكريات الكبسولية (CP5) في الوقاية من العدوى المتسببة عن بكتريا المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثسلين في نماذج الحيوانات لغرض توفير حماية ضد مختلف الاصابات البكتيرية الحادة المتسببة عن الاصابة بكتيريا المكورات العنقودبة الذهبية المقاومة للمثسلين، من خلال حقن سكريات الكبسولة مباشرة لتحفيز الاستجابة المناعية (على عكس التخفيز بواسطة سطح البكتيريا) وذلك بزيادة فعالية التخفيز للمستضد في نموذج الحيوانات تحت الأختبار. تم جمع 180نموذج لعينات سريرية مختلفة من المرضى الوافدين لعدد من المستشفيات الرئيسية في محافظة بابل (مستشفى الحلة التعليمي, مستشفى التعليمي للولادة والاطفال ومستشفى الامام الصادق التعليمي) خلال من الفترة كانون الاول الى تشرين الثاني 2020. وتم استثناء المرضى الذين سبق لهم الدخول للمستشفى مسبقا. شملت النماذج المجموعة خلال الدراسة عينات الدم ,الادرار, سائل النخاع الشوكي, جروح الحروق، وغيرها ، بينت نتائج الدراسة الحالية انه من مجموع 180 عينة سريرية، فأن 46 منها (25.5% ) اظهرت نمو بكتيري موجب على الاوساط الزرعية الاعتيادية، فيما لم تظهر 134 عينة سريرية ( (74.4%نموا موجبا على الاوساط الزرعية بينت نتائج الدراسة انه من مجموع 180 عينة سريرية تم الحصول على 46 عزلة (25.5%) بكتيرية مشخصة بواسطة الاختبارات الكيموحيوية , نظام Vitek2 و نظام أشرطة .API تم الحصول على العزلات البكتيرية من عينات الادرار 16 (34.7%), الحروق15(32.6%), الدم12((26.1% , خراج 2(4.3) والسائل القصبي 1(2.1%). أظهرت نتائج الزرع البكتيري الحصول على 46 عينة سريرية ذات نمو بكتيري موجب , وأن كانت 22 عزلة(47.82%) منها كانت موجبة لصبغة كرام و 24 عزلة (52.17%) كانت سالبة لصبغة كرام. من مجموع 22(47.82%)عزلة موجبة لصبغة كرام ، وجد أن 17 عزلة كانت عائدة لمجموعة المكورات العنقودية السالبة لأنزيم الكوأوكيوليز Coagulase-negative Staphylococci (CoNS) وخمسة عزلات تم تشخيصها على أنها عائدة للنوع S. aureus . اظهرت جميع العزلات الخمسة S. aureus نمط متعدد المقاومة لمقاومة المثسيلين باستخدام أقراص السفوكستين حسب CLSI ، وبالأعتماد على تقنية تفاعل البولميريز المتسلسل، اظهرت النتائج إمتلاك جميع العزلات الخمسة لجين mecA gene في حين أظهرت عزلة واحدة قابليتها على إمتلاك جين متعدد السكريات الخامس للكبسولةCP5 gene) ) وهي العزلة (A.MS isolate). تم العزل والاستخلاص والتنقية الجزيئة لمتعدد البولي السكريد الخامس من عزلات منS. aureus المحلية المقاومة للمثسلين والتي عرفت باسم الباحث(A.MS isolate) وقد الاستخلاص باستخدام طريقة مبتكرة ومحورة لأول مرة في هذه الدراسة من خلال التحوير والمزج بين طريقتين سابقتين.علما انها الدراسة الاولى في هذا المجال على مستوى العراق. تم قياس المكونات الكيميائية لمستخلص التنقية الجزئية لمتعدد البولي سكرايد لكبسولة عزلة A.MS isolate) ) بواسطة جهاز المطياف الضوئي المرئي للكثافة الضوئية وكانت االامتصاصية لمتعدد البولي سكرايد الخامس للكبسول هي (0.279) بتركيز6 μg/m)l ) عند الطول الموجي 206 نانوميتر, للبروتين (0.017) بتركيز(3.4 μg/ml) عند الطول الموجي 280 نانوميتر, للحامض النووي (0.018) بتركيز(3.6 μg/ml) عند الطول الموجي 260 نانوميتر. علما ان التركيز لمستخلص خام لمتعدد البولي سكرايد لكبسولة عزلة A.MS isolate) ) كان 6 ملي غرام/لتر. تضمنت الدراسة الحالية في الجسم الحي in vivo التحري عن استراتيجية المناعية والفعالية لمتعدد البولي سكرايد لكبسولة (CP5)المستحلب بواسطة بولي سوربات 80 المجموعة الاولىI كانت لمتعدد البولي سكرايد لكبسولة عزلة A.MS isolate) ) وتم حقن 8 حيوانات من انثى الجرذان بالغشاء البرويتوني على شكل جرعتين كل جرعة 50 μg (10 μl) لكل حيوان بواقع اسبوع بين الجرعتين. بينما كانت المجموعة II هي مجموعة التحكم او السيطرة وتكونت ايضا من 8 حيوانات من انثى الجرذان تم حقنها بمحلول ملح الفوسفويت المنظم ضمن الغشاء البرويتوني بواقع 10 مايكرولتر لكل حيوان ضمن كل جرعة بواقع اسبوع بين الجرعتين. بعد ثلاثة اسابيع تم سحب دم لكافة الحيوانات لغرض اجراء تحاليل الدم لامراض الدم والفحوصات المناعية قبل اعطاء جرعة التحدي. بعد 30 يوم من الحقن بالجرعة الاولى لمجموع الحيوانات البالغ عددها 16 والمقسمة الى مجموعتين (ثمانية حيوانات لكل مجموعة).تم حقن جميع الحيوانات المتبقية ببكتيريا المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثسيلين بتركيز(107 CFU) وبحجم نصف مل لكل حيوان. وبعد ذلك يتم حساب درجة الحماية بتعداد عدد الحيوانات الباقية على قيد الحياة بعد اسبوع من الحقن البريتوني لها. وجمع نماذج الفحوصات لتحليل الزرع الدم تعداد كريات الدم وانواعها والفحوصات المناعية ضمن 72ساعة بعد الحقن. تم سحب الدم من كافة الحيوانات من القلب تحت التخدير(الكلوروفوم) لاجراء تعداد لكريات الدم البيضاء وانواعها ,فعالية التصفية للدم, قياس تركيز الانترلوكين 4 وتركيز الانترلوكين 12 P40 قبل وبعد جرعة التحدي باستخدام تقنية المقايسة الامتصاصية المناعية للانزيم المرتبط قبل وبعد جرعة التحدي. أظهرت نتائج تحاليل الدم والفحوصات المناعية قبل إعطاء جرعة التحدي عدم وجود زيادة معنوية بعدد كريات الدم البيضاء في المجموعةI متعدد السكريات للكبسولة (11093 cells/mm3) مقارنة بمجموعة السيطرة II 9650 cells/mm3)) بمستوى دلالة p ˂ ) (0.05 وكذلك اظهرت نتائج العد التفريقي لكريات الدم البيضاء عدم وجود فروقات معنوية بين المجموعتين عند مستوى دلالة p ˂ 0.05)). اما بالنسبة لمستوى اللانترلوكين الرابع IL-4 ) )، فقد اظهرت النتائج فروقات معنوية حيث كانت مجموعة كل من متعدد السكريات للكبسولة I (4.775pg/mL) مقارنة بمجموعة السيطرة (0.709pg/mL) II بمستوى دلالة p ˂ 0.05. أظهرت نتائج دراسة مستوى الانترلوكين IL-12-p40) 12-p40) عدم وجود فروقات معنوية في كل من مجموعة متعدد السكريات للكبسولة I (7.496pg/mL) مقارنة بمجموعة السيطرة II (12.115 pg/mL) عند مستوى دلالة p ˂ 0.05)). بينت نتائج فعالية تصفية الدم من العامل الممرض للمكورات العنقودية الذهبية (MRSA) كانت عالية بنسية (71.5%) في مجموعة متعدد السكريات للكبسولة I مقارنة بمجموعة السيطرة II (33.4%) . اظهرت نتائج تحاليل الدم والفحوصات المناعية بعد اعطاء جرعة التحدي وجود زيادة معنوية بعدد كريات الدم البيضاء في كل من المجموعة I متعدد السكريات للكبسولة (9407 cells/mm ومجموعة السيطرة II (4682 cells/mm3) عند مستوى دلالة (p ˂ 0.05) . اظهرت نتائج دراسة مستوى اللانترلوكين الرابع IL-4 ) ) فروقات معنوية حيث كانت مجموعة متعدد السكريات للكبسولة I (8.6676 pg/mL) مقارنة بمجموعة السيطرة II (2.8531 pg/mL ) عند مستوى دلالة (p ˂ 0.05 ). اما بالنسبة لمستوى الانترلوكين IL-12-p40 ) 12-p40)، فقد اظهرت النتائج عدم وجود زيادة معنوبة في كل من مجموعة متعدد السكريات للكبسولة I(10.483 pg/mL) مقارنة بمجموعة السيطرة II (5.792 pg/mL) عند مستوى دلالة p ˂ 0.05)). على علاوة على ذلك، فقد أظهرت نتائج الفحوصات للمقاطع النسيجية للطحال على مستوى المجاميع اختلاف واضح في تمدد منطقة اللب الابيض للحويصلات اللمفاوية على حساب منطقة اللب الاحمر اضافة الى وجود الخلايا الحمضية والبلازما واللمفاوية . بينما كانت الحويصلات اللمفاوية متضيقة بمجموعة السيطرة II ولم تظهر اي تغير .واظهرت كل من مجموعة I متعدد السكريات للكبسولة تمدد جزئي لمنطقة اللب الابيض للحويصلات اللمفاوية على حساب منطقة اللب الاحمر. في حين لم يظهر هنالك اي تغير في مجموعة السيطرة II. نستنتج من خلال هذه الدراسة وجود تأثير واضح لمتعدد السكريات للكبسولة العزلة (A.MS isolate) للمكورات العنقودية المقاومة للمثسيلين المستحلب بواسطة بولي سوربات 80 من خلال تحسين الاستجابة المناعية كمساعد مناعي ضد المكورات العتقودية المقاومة للمثسيلين وتعزيز عوامل المناعة الخلطية اضافة الى حدوث تغييرات نسيجية في الطحال ضد المستضد الداخل للجسم.