منصة الرسائل والاطاريح: التأثير المناعي الدفاعي للمستضد السوطي نوع b كلقاح مرشح ضد الاصابات التنفسية المتسببة عن بكتريا الزوائف الزنجارية

الخلاصة

هدفت الدراسة الحالية إلى التحقيق من استراتيجيات التمنيع الفعالة باستخدام بروتين المستضد السوطي المنقى من بكتريا الزوائف الزنجارية من أجل توفير حماية كاملة ضد عدوى الجهاز التنفسي الحادة الناتجة عن الاصابة ببكتريا الزائفة الزنجارية شديدة المقاومة للمضادات الحياتية (XDR) في نموذج الجرذ. بعد التأكد من تشخيص العزلات البكتيرية المشخصة باستخدام طرق التشخيص التقليدية فضلا عن استخدام جهاز VITEK 2 system، تم استخدام تقنية تفاعلات السلسلة المتبلمرة (PCR) للكشف جزيئيا عن نوع المستضد السوطي عن طريق تضخيم جين fliC . أجريت عملية التنقية لبروتين المستضد السوطي نوع a ونوع b بشكل جزئي من عزلات بكتريا الزوائف الزنجارية رقم 23 ورقم 3 (على التوالي) باستخدام كبريتات الأمونيوم بتركيز 70٪ بالاضافة الى أستخدام أنابيب خاصة فائقة الترشيح (بقطر 30 كيلو دالتون) بينما تمت عملية ازالة السموم الداخلية (LPS) باستخدام اعمدة خاصة، و من ثم تم قياس تركيزها باستخدام تقنية LAL Chromogenic. تم قياس تركيز المستضد السوطي نوع a ونوع b بواسطة مقياس الطيف الضوئي المرئي للأشعة فوق البنفسجية كما وتم التحري عن وجود المستضد السوطي المنقى باستخدام تقنية الترحيل الكهربائي العمودي (SDS-PAGE). قسمت الحيوانات الى ستة مجاميع مختلفة وكالاتي: المجاميع الممنعة بالمستضد السوطي نوع a (مجموعة A1 بدون اصابة و مجموعة A2 المعرضة للإصابة بالعزلة MJ من بكتريا الزوائف الزنجارية)، و المجاميع الممنعة بالمستضد السوطي نوع b (مجموعة B1 بدون اصابة و مجموعة B2 المعرضة للإصابة بالعزلة MJ من بكتريا الزوائف الزنجارية)، و المجاميع غير الممنعة (مجموعة C1 بدون اصابة و مجموعة C2 المعرضة للإصابة بالعزلة MJ من بكتريا الزوائف الزنجارية). وقد تم جمع عينات الدم من جميع الحيوانات عن طريق طعنة القلب بعد تخديرها لغرض إجراء فحوصات الدم والفحوصات المناعية الاخرى. حيث اجريت فحوصات الدم للكشف عن إجمالي الخلايا الليمفاوية بواسطة جهاز آلي لتعداد الدم الكامل (CBC)، كما وتم الكشف عن الخلايا المناعية البائية والخلايا التائية وكذلك تحديد أنواع الخلايا التائية المتمايزة الى الخلايا التائية المساعدة Th ومن ثم تمايزها الى Th1 و Th17 و Th2 وذلك باستخدام واسمات محددة بواسطة تقنية قياس التدفق الخلوي. أظهرت النتائج ان تركيز المستضد السوطي نوع a و نوع b كانت 3.2 مجم/مل و 4.8 مجم/مل على التوالي، و ان مستوى السموم الداخلية قد انخفض بشكل ملحوظ الى أقل من 2 EU/ml (ان مستوى السموم المسموح به عالميا للاستخدام في التجارب قبل السريرية اقل من 20 EU/ml). كما أظهرت النتائج ان الوزن الجزيئي للمستضد السوطي نوع a و نوع b بعد الترحيل الكهربائي العمودي كان 39 كيلو دالتون و 45 كيلو دالتون على التوالي. أظهرت نتائج التعداد الالي للدم (CBC) وجود انخفاظ معنوي في الخلايا الليمفاوية من 0.65 في المجموعة C1 الى 0.59 في المجموعة C2 بينما لم يكن هذا الانخفاض معنويا عند المقارنة بين المجموعتين B1 و B2 (من 0.69 الى 0.67) ، وكذلك فأنه لم يلاحظ هناك فرق معنوي بين المجموعتين A1 و A2 (0.67 لكلى المجموعتين). أظهرت الدراسات المناعية أن الكشف عن الخلايا الليمفاوية باستخدام واسمة CD3 كان متوافقًا مع نتائج تحليل تعداد كريات الدم الكامل (CBC) في تأثير المستضد السوطي نوع b و المستضد السوطي نوع a في منع البكتيريا من تقليل الخلايا الليمفاوية عند المقارنة بين المجاميع الممنعة بالمستضد السوطي نوع b أو المستضد السوطي نوع a والمجاميع غير الممنعة بعد الإصابة (قيمة الاحتمالية 0.038 و 0.039 على التوالي). كما اظهر اختبار الكشف عن الخلايا التائية المساعدة (Th) ارتفاعا معنويا في الخلايا التائية المساعدة في المجاميع الممنعة بالمستضد السوطي نوع b بعد الإصابة أكثر مما هي عليه قبل الاصابة (القيمة الاحتمالية <0.05). في حين أظهرت المجاميع الممنعة بالمستضد السوطي نوع a و المجاميع غير الممنعة انخفاضًا في الخلايا التائية المساعدة (Th) بعد الإصابة. ان قياس إجمالي الخلايا المناعية نوع Th17 و الخلايا Th17 المتفرعة من الخلايا المساعدة (Th) و الخلايا Th17المتفرعة من CTL قد أظهر تأثيرًا جيدًا للمستضد السوطي نوع b في ارتفاع إجمالي الخلايا Th17 و الخلايا المساعدة نوع Th17 المتفرعة من الخلايا المساعدة (Th) في المجموعة الممنعة بعد الإصابة (B2) أكثر مما هي عليه قبل الإصابة (B1) (حيث كانت القيمة الاحصائية < 0.05). بينما أظهرت النتائج انخفاضًا في هذه الخلايا في المجموعة الممنعة بالمستضد السوطي نوع a و المجموعة غير الممنعة. أظهر الكشف عن الخلايا المناعية المساعدة نوع Th1 ارتفاعًا في هذه الخلايا في المجاميع الممنعة بالمستضد السوطي نوع b (B1 وB2) أكثر من المجاميع الممنعة بالمستضد السوطي نوع a (A1 وA2) وأكثر من المجاميع غير الممنعة (C1 و C2). في حين اظهر الفحص عن الخلايا المناعية المساعدة نوع Th2 ارتفاعا في هذه الخلايا في المجاميع غير الممنعة (C1 و C2) في حين انخفاضها في المجاميع الممنعة (A1 و A2 و B1 و B2) قبل وبعد الإصابة. كما أظهرت نتائج الدراسة تأثير المستضد السوطي نوع b في رفع مستوى الخلايا البائية (IgM+ B cells) في المجاميع الممنعة قبل وبعد الاصابة عند المقارنة مع المجاميع غير الممنعة في حين لم يكن هناك اي فرق معنوي عند المقارنة بين المجاميع الممنعة بالمستضد السوطي نوع a عند مقارنتها