منصة الرسائل والاطاريح: تحفيز التغاير الوراثي في نبات النارنج (Citrus aurantium L.) باستخدام تقانة المزارع النسيجية

الخلاصة

بهدف الحصول على التغايرات الوراثية في النارنج (Citrus aurantium L.) خارج الجسم الحي باستخدام المطفرين الكيمياويين ازايد الصوديوم والكولجيسين ، استعملت طريقتان رئيسيتان، شملت اولاهما تحفيز نشوء الافرع من البراعم الجانبية في العقد المستأصلة من البادرات النامية في التربة ومن ثم تجذيرها لتكوين نبيتات ملائمة للاقلمة. اما الطريقة الثانية فقد اعتمدت على استحثاث نشوء الكالس من أجزاء البادرات المختلفة ومن ثم تحفيز تكوين البراعم العرضية منه. وفي كلا الطريقتين تم اختبار توليفات مختلفة من السايتوكاينينات والاوكسينات والجبرلينات. عقمت الاجزاء النباتية بمادة هايبوكلورات الصوديوم بتركيز 1.5% لمدة 15 دقيقة بعد غمرها لمدة 30 ثانية في الكحول الاثيلي المطلق ( والذي كان مؤثرا في التخلص من مسببات التلوث ) قبل زراعة الجزء النباتي على الوسط الغذائي MT. اظهرت نتائج الطريقة الاولى تفوقا معنويا للتركيز 1.5 ملغم/لتر من BA في تحفيز نشوء الافرع الجانبية. وان تجهيز GA3 بتركيز 1.5 ملغم/لتر معه في الوسط الغذائي MT كان محفزا لاستطالة الافرع النامية , وان اضافة NAA معهما الى الوسط لم يكن مؤثرا في تحفيز نشوء او استطالة الافرع. ووجد ان افضل تجذير للافرع الناشئة حصل في الوسط الغذائي MS بنصف القوة والمجهز بـ 1 ملغم/لتر من NAA. وعند معاملة العقد بازايد الصوديوم بالتراكيز ( 0.05 ، 0.1 ، 0.5 أو 1.0 ) ملي مولر والكولجيسين بالتراكيز (0.05 ، 0.1 ، 0.5 أو 1.0 )% لمدة ( 30 ، 60 أو 90) دقيقة ومقارنتها، لوحظ حصول انخفاض معنوي في النسب المئوية لتفتح البراعم وتجذير الافرع ومعدلات عدد وطول كل من الافرع والجذور الناتجة مع زيادة التركيز ومدة الغمر مقارنة بمعاملة السيطرة. وسجلت تغايرات في لون وشكل اوراق الافرع الناتجة. كما اجريت عملية الاقلمة للنبيتات التي تم تجذيرها لاجراء الدراسات المستقبلية عليها. اظهرت نتائج الطريقة الثانية تفوقا معنويا للسويقة الجنينية العليا على بقية الاجزاء النباتية في استجابتها لتكوين الكالس (99.25%). كما تفوق التركيز 1.5 ملغم/لتر من كل من BA و NAA معنويا في معدلات استحثاث الكالس والوزن الطري والجاف له مقارنة ببقية التوليفات لمنظمات النمو. ولوحظ تغير لون الكالس وتدهوره بعد اعادة زراعته للمرة الرابعة وعلى التوليفة المذكورة اعلاه نفسها . غُمر الكالس المستحث بمحاليل التراكيز انفة الذكر من ازايد الصوديوم والكولجيسين وللمدد الزمنية نفسها واعادة زراعته على نفس الوسط الغذائي لاستحثاث وادامة الكالس ومقارنته مع ما ذكر اعلاه. لوحظ حصول انخفاض معنوي في النسب المئوية لبقاء الكالس حيا ومعدلات الوزن الطري والجاف له لاسيما في التراكيز العالية من المطفرين (1.0 ملي مولر من ازايد الصوديوم و 1.0% من الكولجيسين) ولجميع المدد الزمنية. وبينت النتائج ان افضل وسط غذائي لتحفيز تكوين البراعم العرضية من الكالس هو MT المجهز بـ(ملغم/لتر) BA (1.5) + NAA (0.1) + مستخلص الشعير (ME) (500). وقد انخفضت معدلات تكوين الاجنة من الكالس المعامل بالمطفرين الكيمياويين ولجميع التراكيز ومدد الغمر المذكورة انفا مقارنة بالسيطرة. كما اظهرت نتائج عملية خلط الكالس الناتج من البادرات البيضاء مع المنتج من البادرات الخضراء تدهور الاول بصورة اسرع من الثاني مع استمرار نمو الاخير. بينت نتائج تحليل البروتين الكلي باستخدام تقنية الهجرة الكهربائية على الهلام المتعدد الاكريل امايد (Polyacrylamide) لعينات الكالس واوراق الافرع المحفزة من البراعم الجانبية (المعاملة وغير المعاملة بازايد الصوديوم والكولجيسين) وجود اختلافات في عدد الحزم او مواقعها او شدة ظهورها على الهلام فضلا عن اختلاف الاوزان الجزيئية المقدرة للحزم البروتينية الظاهرة على الهلام بين تراكيز المواد المدروسة مقارنة بالسيطرة . كما اظهرت نتائج تفاعل PCR باستخدام مؤشرات RAPD والترحيل على هلام الاكاروز لعينات DNA المعزولة من الكالس والاوراق اعلاه وباستعمال التراكيز للمواد المدروسة نفسها وجود اختلافات في عدد الحزم المتضاعفة او مواقعها او شدة تألقها او احجامها الجزيئية المقدرة.