منصة الرسائل والاطاريح: دراسة مناعية وجزيئية لمرضى التدرن الرئوي

الخلاصة

لا يزال مرض التدرن يمثل مشكلة صحية عامة على الرغم من برامج المكافحة الدولية ، الأفراد المصابون بعدوى التدرن الكامنة يزيدون بشكل كبير من عدد حالات التدرن النشط وهم معرضين لخطر الإصابة بالمرض مدى الحياة. هدفت الدراسة الحالية الى تحديد بعض المؤشرات المناعية والوراثية في مرحلتين أثناء تطور مرض التدرن النشط وعدوى التدرن الكامنة وتقييم دورها كواسمات تنبؤية في مرضى التدرن النشط والكامن. صُمِمت الدراسة الحالية كدراسة الحالات والشواهد وأجريت خلال الفترة من شباط إلى أيلول ( ٢٠٢١( في معهد التدرن الوطني / المختبر المرجعي للتدرن في بغداد. جمعت 140 عينة بلغم من مرضى يشتبة اصابتهم بلتدرن الرئوي ، وتم تأكيد إصابة 60 مريض بناءً على النتائج الإيجابية من خلال تصبيغ العصيات أو الزرع البكتيري أو من الاختبار الجزيئي Gene Xpert. تًضمنت البيانات الديموغرافية لمرضى التدرن الرئوي النشط فئات عمرية تراوحت من 16 إلى 68 عامًا بمعدل اعمار) 36.16 ± 14.16( سنة , وكان عدد الاناث 21 (35.0٪) و 39 (65.0٪) ذكورآ وكان هناك فرق معنوي في حدوث التدرن الرئوي النشط بين الذكور والإناث (P = 0.02). أظهرت الفئة العمرية (25-34 ) سنة تكرارا أعلى في مرضى التدرن (33.3٪) من الفئات العمرية الأخرى ، مع وجود فروق ذات دلالة إحصائية بين جميع الفئات العمرية (p = 0.001). تم حساب كفاءة الاختبارات التشخيصية باستخدام طريقة الزرع كمعيار ذهبي حيث أعطى اختبار Gene Xpert حساسية ونوعية عالية بلغت 100٪ و 80.8٪ على التوالي . من بين 60 عينة موجبة تم تشخيصها بواسطة GeneXpert ، أظهرت النتائج أن سبع عزلات (11.67٪) من العصيات الدرنية كانت مقاومة للمضاد الحيوي الريفامبيسين. شُخص المشتركين المشتبة اصابتهم بالتدرن الكامن ومجموعة الافراد الاصحاء بواسطة QuantiFERON-TB Gold (QFT- Plus assay ) وتبين ان من مجموع 164 مشتركا مشتبة اصابتهم بلتدرن الكامن,أظهر 60 شخصًا (36.6 ٪) نتائج إيجابية لهذا الاختبار وتم تعريفهم على أنهم مصابون بالتدرن الكامن ،تضمنوا 37 ذكرًا و 23 إناثًا تراوحت أعمارهم بين )18 – 66( عامًا ، وكانت 104 عينة (63.4 ٪) سلبية.وتبين ان 40 شخصًا سليمًا لم يتعرضوا لمرض التدرن واعطوا نتيجة سلبية لهذا الاختبار ،تضمنوا 22 ذكرًا و 18 أنثى و تراوحت أعمارهم بين )15 – 70( عامًا. كانت معدلات الايجابية في انبوب المستضد الاول TB1 و انبوب المستضد الثاني هيTB2 (27.4٪ و 30.5٪( على التوالي. كذلك ، لم يكن هناك فرق معنوي في معدل الإيجابية بين TB1 و TB2 . كان معدل التوافق بينهما حوالي 84.8٪ ، معامل كابا 0.630. كانت هنالك زيادة غير معنوية في معدل تركيز الانترفيرون كاما (IFN-γ) المتحرر في TB2 (p = 0. 142) مقارنة بـ TB1 بين العينات الإيجابية لاختبار QFT-Plus. لتقييم المساهمة الخاصة للخلايا التائية السامة ,CD8 + Tتم استخدام القيم التفاضلية TB2 - TB1 كتقدير غير مباشر لتحفيز CD8 مع مستضدات TB2. لوحظ في الدراسة الحالية وجود استجابة أكبر لمستضد TB2 TB2−TB1 >0.6 IU/mL)) في 22 (36.7٪) فردًا مصابًا بالتدرن الكامن من مجموع العينات الموجبة لهذا الاختبار .أما فيما يتعلق بعوامل الخطر المرتبطة بالنتائج الإيجابية لاختبار QFT-Plus ، كانت الفئة العمرية الأكثر شيوعًا هي) 45-54( سنة بنسبة 30.0٪ ، تليها الفئة العمرية )55 ( سنة بنسبة 23.3٪ وارتبطوا معنويا بالنتائج الإيجابية لهذا الاختبار( OR: 3.8, , P=0.022) و (OR: 4.03, P=0.024 (على التوالي . كان الذكور( 61.7٪) الاكثر تكرارًا من الإناث ( 38.3٪) في مجموعة التدرن الكامن وارتبطوا معنويا بالنتائج الإيجابية لهذا الاختبار (OR: 2.19, P=0.018). بينت نتائج المقايسية الامتصاصية المناعية للانزيم المرتبط ELISA)) أن هنالك زيادة معنوية في معدل تركيزالحركي الخلوي IL-18 في مصل مجموعة التدرن الرئوي النشط مقارنة بمجموعة التدرن الكامن و الافراد الاصحاء (P <0.001) ، كذلك كانت هنالك زيادة معنوية في معدل تركيزالحركي الخلوي IL-18 في مصول مجموعة التدرن الكامن مقارنةً بمجموعة الافراد الاصحاء (P<0.001). في حين ، كان هنالك زيادة معنوية في معدل تركيزالحركي الخلوي IL-17A في مصول مجموعة التدرن الكامن مقارنةً بمجموعة الافراد الاصحاء(P = 0.002) ومجموعة التدرن النشط .(p <0.001) تم إجراء تحليل ROC باستخدام IL-17A و IL-18 لتقدير قدرة هذه المعلمات على التنبؤ بالتدرن النشط والتدرن الكامن. حيث أظهرالحركي الخلوي IL-17A قوة تمييزية كبيرة مع قيم عالية من AUC والحساسية والخصوصية في تمييز مجموعة التدرن الكامن من مجموعة الافراد الاصحاء (الحساسية 98٪ ، الخصوصية 95٪ ، AUC= 0.993).بينما أظهر الحركي الخلوي IL-18 قوة تمييزية كبيرة مع قيم عالية من AUC والحساسية والخصوصية في التمييز بين التدرن النشط مقابل مجموعة الافراد الاصحاء (الحساسية 92٪ ، الخصوصية 90٪ ، (AUC = 0.952 تضمنت الدراسة الجزيئية،تحديد التغاير الوراثي rs1946518 C> A لجين IL-18 و التغاير الوراثي rs2275913 G> A لجين IL17A في مجموعة التدرن النشط والكامن بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل المتخصص بالاليل allele-specific polymerase chain reaction واُكدت نتائج هذا التحليل بواسطة طريقة سانجر Sanger sequencing method، لدراسة الارتباط بين التغايرات الوراثية اعلاة وقابلية الإصابة بالتدرن النشط والكامن ، تم حساب تكرار الطرز الوراثية والأليلات للمجموعات المدروسة. حيث تبين في مجموعة الافراد الاصحاء ، لم يكن لتوزيع الطرز الوراثية أي انحراف عن Hardy-Weinberg equilibrium (P> 0.05) .اما فيمايتعلق بالتغاير الوراثي ( C/A (rs1946518 في جين IL-18 ،فقد أوضحت النتائج أن ألاليل A كان أكثر تكراراً في مرضى التدرن النشط مقارنة بمجوعة الافراد الاصحاء (60٪ مقابل 38.75٪) بقيمة أرجحية ( (OR: 2.37 وكان هذا الاختلاف ذا دلالة إحصائية (P = 0.003 ) ، وارتبطت الطرز الوراثية الطافرة AA (OR: 4.67, p=0.007 ) و CA (OR: 3.17, P=0.024) بخطر الإصابة بالتدرن النشط ؛ على التوالي. كذلك ، تبين ان لدى مرضى التدرن تكراراً أعلى للأليل A مقارنة بمجموعة التدرن الكامن 60) ٪ مقابل 45.83 ٪) بقيمة أرجحية ( (OR: 1.77 وكان هذا الاختلاف ذا دلالة إحصائية (P = 0.028 ) وارتبط الطراز الوراثي متماثل اللواقح الطافرة AA لـ rs1946518 معنوياً بخطر الاصابة بالتدرن النشط (OR: 2.99,p = 0.035) مقارنة بمجموعة التدرن الكامن.لم تجد الدراسة الحالية أي علاقة ذات دلالة إحصائية بين تكرار الطرز الوراثية أو الأليلات لـلتغاير الوراثي( A (rs2275913 G> لجين IL-17A في مجموعة مرضى التدرن النشط ومجموعة التدرن الكامن مقارنة مع مجموعة الافراد الاصحاء. تم التنميط الوراثي للتغايرات الوراثية ( (rs7580900, rs7580912 rs9061لجين Sp110 في مجموعة التدرن الكامن بواسطة طريقة سانجر Sanger Sequencing. بينت النتائج أن ألاليل الطافر C في rs7580900 و rs7580912 كان أكثر تكراراً في مجموعة التدرن الكامن مقارنة بمجموعة الافراد الاصحاء (47٪ مقابل 36.25٪ ، 44٪ مقابل 27.5٪) ، على التوالي. كان الطراز الوراثي الطافر متغاير اللواقح "TC" في rs7580900 و rs7580912 أكثر تكرارًا في مجموعة التدرن الكامن مقارنة بمجموعة الافراد الاصحاء وارتبط معنويا بخطر الاصابة بعدوى التدرن الكامنة (P = 0.011 ، OR: 3.53) و (P = 0.02 ، (OR: 2.88 ، على التوالي. بالاضافة الى ذلك، كان النمط الوراثي الطافر متغاير اللواقح "GA" لـ rs9061 أكثر شيوعًا في مجموعة التدرن الكامن مقارنة بمجموعة الافراد الاصحاء (34٪ مقابل 15٪) على التوالي ، وكان هذا الطراز الوراثي مرتبطا معنويا بخطر الاصابة بعدوى التدرن الكامنة (P=0.03; OR: 3.14) . أن الكشف المبكر لمقاومة المضاد الحيوي الريفامبيسين قد يسهم في تقليل حدوث سلالات التدرن المقاوم للادوية (MDR) بين مرضى التدرن. تلعب مستويات المصول من الحركي الخلوي (IL-17A) والحركي الخلوي (IL-18) أدوارًا تفريقية في مرحلتين من تطور مرض التدرن ويمكن استغلالها لإنشاء تشخيصات جديدة ، من ناحية أخرى ، ارتبط تعدد الأشكال الوراثية لجين IL-18 ((IL-18-607 C>A