تعد الاشريكيا القولونية المعوية الممرضة (EPEC) من أهم مسببات الأمراض التي تصيب الأطفال في جميع أنحاء العالم وهي أحد الأسباب الرئيسية للإسهال.
جمعت 337 ) ) عينة براز من الاطفال (اقل من 5 سنوات) الذين يعانون من الاسهال المائي في دراسة مقطعية, تم الحصول عليها من مستشفى بابل التعليمي للولادة والأطفال ومستشفى ابن سيف للأطفال وقطاع الحلة الأول والثاني في محافظة بابل بين شهر ايار 2023 إلى شهر تشرين الاول 2023. أظهرت النتائج عائدية( 92 ) عزلة الى الاشريكيا القولونية ((27.21% بعد تشخيصها بالاختبارات التقليدية الشكلية والمجهرية والكيموحيوية وبعد ذلك بنظام الفايتك ، ومن ثم تأكيدها عن طريق تفاعل البلمرة المتسلسل باستخدام جين 16SrRNA الخاص بالنوع . أظهرت النتائج الحالية، من بين ( 92 ) عزلة لبكتريا الاشريكيا القولونية كانت (28)(30.4%) عزلة عائدة للبكتريا المعوية الممرضة ((EPEC اذ كانت إيجابية لجينات الفوعة المستهدفة ( eaeA و/اوbfpA) بوساطة تفاعل البلمرة المتسلسل. تم تصنيف عزلات EPEC إلى صنفين : EPEC نمطية والاخرى غير نمطية اعتمادا على وجود أو عدم وجود الجينات (eaeA وbfpA). كشفت نتائج التحليل الإحصائي ان عزلات EPEC أكثر شيوعًا عند الإناث مقارنة بالأطفال الذكور ( (18) / (64.3%مقابل10 ) / (35.7%) ) على التوالي بوساطة اختبارمربع كاي عند قيمة p. ≤ 0.05، في حين كانت معدلات عزل الأطفال غير المصابين بـ EPEC اكثر شيوعًا عند الذكور مقارنة بالأطفال الإناث ((44) / (68.8% مقابل20) / (31.3%) ) على التوالي بوساطة مربع كاي عند قيمة p. ≤ 0.05, كانت تسجيل ارتفاع الإصابة بالإسهال في الفئات العمرية من (1-15 شهرا) حيث أنهم أكثر الفئات عرضة لاصابة بهذا المرض. تم فحص الحساسية الدوائية للمضادات الحيوية باستخدام نظام الفايتك لفحص حساسية عزلات الاشريكيا القولونية للمضادات الحيوية. اوضحت النتائج عدم وجود دلالة احصائية معنوية (p > 0.05) عند المقارنة بين أنماط مقاومة مضادات الميكروبات بين العزلات EPEC والعزلات nonEPEC. بشكل عام، أظهرت العزلات nonEPEC وEPEC مقاومة عالية للأمبيسيلين ((61) / (95.3% مقابل 26) / (92.9%))، يليها سيفازولين ((59) / ( 92.2%مقابل 24) / (85.7%)) نسبيا، تم تسجيل مقاومة أقل ضد سيفترياكسون ((36) / (56.3% مقابل 15)/ (53.6%))، سيفوكسيتين ((32)/(50.0% مقابل 13)/(46.4%))، تريميثوبريم ((28)/(43.8% مقابل 12)/(42.9%))، سيفتازيديم ((25)/(39.1% مقابل 10)/(35.7%))، ليفوفلوكساسين ((15) /(23.4%مقابل 9)/(32.1%))، سيبروفلوكساسين ((14)/(21.9% مقابل9)/(32.1%) )، سيفيبيم ((8)/(12.5% مقابل4)/ (14.3%) ) وكانت نسبة الإيميبينيم والجنتاميسين ((1)/(1.6% مقابل 1) /(3.6%)) لكل منهما. لم يتم تسجيل مقاومة بالنسبة للارتابينيم والتيجيسيكلين والاميكاسين ((0/0.0% مقابل 0/0.0%)) والنيتروفورانتوين ((0/0.0% مقابل1/3.6%) ) . اظهر التحليل الإحصائي لهذه الدراسة عدم وجود علاقة معنوية بشكل كبير (P> 0.05) بين المجموعات الثلاث لعزلات tEPEC وaEPEC وnon EPEC مع اختبار الحساسية للمضادات الحيوية لفئات المضادات الحيوية المختلفة. بلغت نسبة المقاومة للأدوية المتعددة (MDR) في عزلات الإشريكية القولونية (56) (60.9%) من أصل (92) عزلة، وهي أعلى من نسبة العزلات غير المقاومة للأدوية البالغة (36) (39.1%)، على الرغم من ذلك لا يوجد فرق معنوي (P>0.05) بين مجموعةEPEC ومجموعةnonEPEC . علاوة على ذلك، تم تصنيف (16) (57.1%) من (28) عزلة EPEC على أنها MDR، والتي لم تكن مختلفة بشكل كبير عن المجموعة التي لا تحتوي على MDR والتي تضم .(12) (42.9%)
تم استخدام نظام الفايتك أيضًا للكشف عن مضادات البيتالاكتام الواسعة الطيف ESBL اذ وجد أن (51) (55.4%) من أصل (92) عزلة كانت إيجابية لـ ESBL ولايوجد اختلاف بشكل كبير عن المجموعة السلبية , (41) (44.6%) (p=0.495 ). بالإضافة إلى ذلك، تم اختبار (15)(53.6%) من (28) عزلة EPEC إيجابية لـ ESBL، ولا يوجد اختلاف بشكل كبير عن المجموعة السلبية المكونة من (13)(46.4%) . فيما يتعلق بنتائج المقارنة بين الكشف المظهري لـ ESBL السلبي والإيجابي، أظهر التحليل الإحصائي وجود علاقة معنوية عالية لبعض المضادات الحيوية التابعة للعزلات المنتجة للـ ESBL والتي تشمل سيفازولين، سيفتازيديم، سيفترياكسون، وتريميثوبريم، في حين لم يوجد فرق معنوي للبيبيراسيللين/ تازوباكتام، إيميبينيم، جنتاميسين، سيبروفلوكساسين، ليفوفلوكساسين، ونيتروفورانتوين. اظهرت نتائج اختبار تكوين الاغشية الحيوية, من بين (92)عزلة من الاشريكيا القولونية ,اظهرت ان جميع العزلات كانت مكونة للاغشية الحيوية وبنسبة (100%) وتم تصنيفها على النحو التالي: (42)(45.7%) شكلت غشاء حيوي ضعيف، (40) (43.5%) شكلت غشاء حيوي معتدل، (10) (10.9%) شكلت غشاء حيوي قوي. وقد وجد أن مقاومة مضادات الميكروبات لها علاقة معنوية (p≤ 0.05) بين إنتاج الأغشية الحيوية ومقاومة مضادات الميكروبات بما في ذلك الأمبيسيلين والسيفوكسيتين، في حين لم يكن هناك ارتباط كبير في الفئات الأخرى من المضادات الحيوية.
تم إخضاع جميع عزلات EPEC (28) لتقنية تفاعل البلمرة المتسلسل للكشف عن خمسة جينات لـــ(ESBL)، وأظهرت النتائج ارتفاع معدل انتشار blaCTX-M1 و blaCTX-M15 و blaTEM (100%) يليه blaCTX-M2 (89.3%) وblaSHV (21.4%) بينما لم يتم الكشف عن الجينات أخرى.
أظهر التحليل الجزيئي للمجموعات التطورية (chuA, yjaA, TspE4. C2, arpA, arpAgpEh, trpA and trpBA) بوساطة PCR المزدوج والرباعي. أن معظم عزلات EPEC تنتمي إلى المجموعة العرقية D (28.57%) ومجموعة C (28.57%) . تأثرت تقريبا كل المجموعات التطورية بمعدلات مقاومة عالية مع الأمبيسيلين، السيفازولين، السيفترياكسون والتريميثوبريم/ السلفاميثازول في حين أن معدلات المقاومة كانت عالية للمضادين للسيبروفلوكساسين والليفوفلوكساسين في كل من المجموعات A، C وE. كما أظهر التحليل الإحصائي بوساطة اختبار مربع كاي وجود ارتباط معنوي (P ≤0.05) بين المجموعة التطورية D مع non-MDR بين عزلات الاشريكيا القولونية المعوية الممرضة.
أظهرت نتائج الكشف الجزيئي لجينات الفوعة أن أعلى معدل لجين pheU بين عزلات EPEC كان في (28)(100%)، يليه جين pheV ((23) (82.1 وجين SelC في .(2)(7.1%)
تبين النتائج الحالية المتعلقة بتحليل جينات مقاومة المضادات الحيويةblaTEM وblaCTX M-1 لعزلات الخمسة لكل واحدة المرسلة لتحليل تسلسل النيوكلوتيدات, تشابة وتماثل جيني بالتسلسل النيوكليوتيدي وبنسبة (100%) مع التسلسل وعلى اساس المعلومات المتوفرة في الموقع NCBI BLAST . بينما اظهرت دراسة التباين الجيني لجينات blaCTX M-15 وblaSHV عن وجود طفرات نقطية عند مقارنتها مع تسلسل NCBI BLAST.
الاستنتاج: غالبية عزلات EPEC تنتج ESBL، ولها مستويات عالية من المقاومة للمضادات الحيوية الأمبيسيلين وسيفازولين، وهي حساسة جدًا لجميع المضادات الحيوية تقريبًا، بما في ذلك الإرتابينيم والأميكاسين والتيجيسيكلين والإيميبينيم والجنتاميسين والنيتروفورانتوين. كان النمط الوراثي غير النمطي EPEC أكثر شيوعًا لعدوى المسببه للإسهال من النمط الوراثي النمطي لـ EPEC، والذي قد يعزى إلى جينات bla SHV وbla CTXM -15 التي تكشف عن طفرات نقطية كانت مسؤولة عن مقاومة المضادات الحيوية في هذا البحث. تعد معرفة مقاومة EPEC للمضادات الحيوية أمرًا بالغ الأهمية في تحديد العلاج المناسب في حالات العدوى الإسهالية الرئيسية وصياغة إرشادات محلية مضادة للميكروبات.
تعد الاشريكيا القولونية المعوية الممرضة (EPEC) من أهم مسببات الأمراض التي تصيب الأطفال في جميع أنحاء العالم وهي أحد الأسباب الرئيسية للإسهال.
جمعت 337 ) ) عينة براز من الاطفال (اقل من 5 سنوات) الذين يعانون من الاسهال المائي في دراسة مقطعية, تم الحصول عليها من مستشفى بابل التعليمي للولادة والأطفال ومستشفى ابن سيف للأطفال وقطاع الحلة الأول والثاني في محافظة بابل بين شهر ايار 2023 إلى شهر تشرين الاول 2023. أظهرت النتائج عائدية( 92 ) عزلة الى الاشريكيا القولونية ((27.21% بعد تشخيصها بالاختبارات التقليدية الشكلية والمجهرية والكيموحيوية وبعد ذلك بنظام الفايتك ، ومن ثم تأكيدها عن طريق تفاعل البلمرة المتسلسل باستخدام جين 16SrRNA الخاص بالنوع . أظهرت النتائج الحالية، من بين ( 92 ) عزلة لبكتريا الاشريكيا القولونية كانت (28)(30.4%) عزلة عائدة للبكتريا المعوية الممرضة ((EPEC اذ كانت إيجابية لجينات الفوعة المستهدفة ( eaeA و/اوbfpA) بوساطة تفاعل البلمرة المتسلسل. تم تصنيف عزلات EPEC إلى صنفين : EPEC نمطية والاخرى غير نمطية اعتمادا على وجود أو عدم وجود الجينات (eaeA وbfpA). كشفت نتائج التحليل الإحصائي ان عزلات EPEC أكثر شيوعًا عند الإناث مقارنة بالأطفال الذكور ( (18) / (64.3%مقابل10 ) / (35.7%) ) على التوالي بوساطة اختبارمربع كاي عند قيمة p. ≤ 0.05، في حين كانت معدلات عزل الأطفال غير المصابين بـ EPEC اكثر شيوعًا عند الذكور مقارنة بالأطفال الإناث ((44) / (68.8% مقابل20) / (31.3%) ) على التوالي بوساطة مربع كاي عند قيمة p. ≤ 0.05, كانت تسجيل ارتفاع الإصابة بالإسهال في الفئات العمرية من (1-15 شهرا) حيث أنهم أكثر الفئات عرضة لاصابة بهذا المرض. تم فحص الحساسية الدوائية للمضادات الحيوية باستخدام نظام الفايتك لفحص حساسية عزلات الاشريكيا القولونية للمضادات الحيوية. اوضحت النتائج عدم وجود دلالة احصائية معنوية (p > 0.05) عند المقارنة بين أنماط مقاومة مضادات الميكروبات بين العزلات EPEC والعزلات nonEPEC. بشكل عام، أظهرت العزلات nonEPEC وEPEC مقاومة عالية للأمبيسيلين ((61) / (95.3% مقابل 26) / (92.9%))، يليها سيفازولين ((59) / ( 92.2%مقابل 24) / (85.7%)) نسبيا، تم تسجيل مقاومة أقل ضد سيفترياكسون ((36) / (56.3% مقابل 15)/ (53.6%))، سيفوكسيتين ((32)/(50.0% مقابل 13)/(46.4%))، تريميثوبريم ((28)/(43.8% مقابل 12)/(42.9%))، سيفتازيديم ((25)/(39.1% مقابل 10)/(35.7%))، ليفوفلوكساسين ((15) /(23.4%مقابل 9)/(32.1%))، سيبروفلوكساسين ((14)/(21.9% مقابل9)/(32.1%) )، سيفيبيم ((8)/(12.5% مقابل4)/ (14.3%) ) وكانت نسبة الإيميبينيم والجنتاميسين ((1)/(1.6% مقابل 1) /(3.6%)) لكل منهما. لم يتم تسجيل مقاومة بالنسبة للارتابينيم والتيجيسيكلين والاميكاسين ((0/0.0% مقابل 0/0.0%)) والنيتروفورانتوين ((0/0.0% مقابل1/3.6%) ) . اظهر التحليل الإحصائي لهذه الدراسة عدم وجود علاقة معنوية بشكل كبير (P> 0.05) بين المجموعات الثلاث لعزلات tEPEC وaEPEC وnon EPEC مع اختبار الحساسية للمضادات الحيوية لفئات المضادات الحيوية المختلفة. بلغت نسبة المقاومة للأدوية المتعددة (MDR) في عزلات الإشريكية القولونية (56) (60.9%) من أصل (92) عزلة، وهي أعلى من نسبة العزلات غير المقاومة للأدوية البالغة (36) (39.1%)، على الرغم من ذلك لا يوجد فرق معنوي (P>0.05) بين مجموعةEPEC ومجموعةnonEPEC . علاوة على ذلك، تم تصنيف (16) (57.1%) من (28) عزلة EPEC على أنها MDR، والتي لم تكن مختلفة بشكل كبير عن المجموعة التي لا تحتوي على MDR والتي تضم .(12) (42.9%)
تم استخدام نظام الفايتك أيضًا للكشف عن مضادات البيتالاكتام الواسعة الطيف ESBL اذ وجد أن (51) (55.4%) من أصل (92) عزلة كانت إيجابية لـ ESBL ولايوجد اختلاف بشكل كبير عن المجموعة السلبية , (41) (44.6%) (p=0.495 ). بالإضافة إلى ذلك، تم اختبار (15)(53.6%) من (28) عزلة EPEC إيجابية لـ ESBL، ولا يوجد اختلاف بشكل كبير عن المجموعة السلبية المكونة من (13)(46.4%) . فيما يتعلق بنتائج المقارنة بين الكشف المظهري لـ ESBL السلبي والإيجابي، أظهر التحليل الإحصائي وجود علاقة معنوية عالية لبعض المضادات الحيوية التابعة للعزلات المنتجة للـ ESBL والتي تشمل سيفازولين، سيفتازيديم، سيفترياكسون، وتريميثوبريم، في حين لم يوجد فرق معنوي للبيبيراسيللين/ تازوباكتام، إيميبينيم، جنتاميسين، سيبروفلوكساسين، ليفوفلوكساسين، ونيتروفورانتوين. اظهرت نتائج اختبار تكوين الاغشية الحيوية, من بين (92)عزلة من الاشريكيا القولونية ,اظهرت ان جميع العزلات كانت مكونة للاغشية الحيوية وبنسبة (100%) وتم تصنيفها على النحو التالي: (42)(45.7%) شكلت غشاء حيوي ضعيف، (40) (43.5%) شكلت غشاء حيوي معتدل، (10) (10.9%) شكلت غشاء حيوي قوي. وقد وجد أن مقاومة مضادات الميكروبات لها علاقة معنوية (p≤ 0.05) بين إنتاج الأغشية الحيوية ومقاومة مضادات الميكروبات بما في ذلك الأمبيسيلين والسيفوكسيتين، في حين لم يكن هناك ارتباط كبير في الفئات الأخرى من المضادات الحيوية.
تم إخضاع جميع عزلات EPEC (28) لتقنية تفاعل البلمرة المتسلسل للكشف عن خمسة جينات لـــ(ESBL)، وأظهرت النتائج ارتفاع معدل انتشار blaCTX-M1 و blaCTX-M15 و blaTEM (100%) يليه blaCTX-M2 (89.3%) وblaSHV (21.4%) بينما لم يتم الكشف عن الجينات أخرى.
أظهر التحليل الجزيئي للمجموعات التطورية (chuA, yjaA, TspE4. C2, arpA, arpAgpEh, trpA and trpBA) بوساطة PCR المزدوج والرباعي. أن معظم عزلات EPEC تنتمي إلى المجموعة العرقية D (28.57%) ومجموعة C (28.57%) . تأثرت تقريبا كل المجموعات التطورية بمعدلات مقاومة عالية مع الأمبيسيلين، السيفازولين، السيفترياكسون والتريميثوبريم/ السلفاميثازول في حين أن معدلات المقاومة كانت عالية للمضادين للسيبروفلوكساسين والليفوفلوكساسين في كل من المجموعات A، C وE. كما أظهر التحليل الإحصائي بوساطة اختبار مربع كاي وجود ارتباط معنوي (P ≤0.05) بين المجموعة التطورية D مع non-MDR بين عزلات الاشريكيا القولونية المعوية الممرضة.
أظهرت نتائج الكشف الجزيئي لجينات الفوعة أن أعلى معدل لجين pheU بين عزلات EPEC كان في (28)(100%)، يليه جين pheV ((23) (82.1 وجين SelC في .(2)(7.1%)
تبين النتائج الحالية المتعلقة بتحليل جينات مقاومة المضادات الحيويةblaTEM وblaCTX M-1 لعزلات الخمسة لكل واحدة المرسلة لتحليل تسلسل النيوكلوتيدات, تشابة وتماثل جيني بالتسلسل النيوكليوتيدي وبنسبة (100%) مع التسلسل وعلى اساس المعلومات المتوفرة في الموقع NCBI BLAST . بينما اظهرت دراسة التباين الجيني لجينات blaCTX M-15 وblaSHV عن وجود طفرات نقطية عند مقارنتها مع تسلسل NCBI BLAST.
الاستنتاج: غالبية عزلات EPEC تنتج ESBL، ولها مستويات عالية من المقاومة للمضادات الحيوية الأمبيسيلين وسيفازولين، وهي حساسة جدًا لجميع المضادات الحيوية تقريبًا، بما في ذلك الإرتابينيم والأميكاسين والتيجيسيكلين والإيميبينيم والجنتاميسين والنيتروفورانتوين. كان النمط الوراثي غير النمطي EPEC أكثر شيوعًا لعدوى المسببه للإسهال من النمط الوراثي النمطي لـ EPEC، والذي قد يعزى إلى جينات bla SHV وbla CTXM -15 التي تكشف عن طفرات نقطية كانت مسؤولة عن مقاومة المضادات الحيوية في هذا البحث. تعد معرفة مقاومة EPEC للمضادات الحيوية أمرًا بالغ الأهمية في تحديد العلاج المناسب في حالات العدوى الإسهالية الرئيسية وصياغة إرشادات محلية مضادة للميكروبات.