منصة الرسائل والاطاريح: دراسة جزيئية لبعض جينات بين بكتريا β-lactamase Pseudomonas aeruginosa ذات المقاومة المتعددة للأدوية

الخلاصة

الزوائف الزنجارية هي بكتيريا هوائية سالبة الجرام ظهرت كواحدة من أكثر مسببات الأمراض إشكالية التي تميز سلالاتها المنتشرة في العراق. تم جمع 194 عينة والتي كانت كالاتي من جروح (96) ، قدم سكري (13) ، ادرار (5) ، سائل رئوي (2) ، طلق ناري وعبوات ناسفة (5) وحروق (73) مسحة من المرضى. تم نقل العينات من هؤلاء المرضى الراقدين في مستشفيات مدينة الحلة (مستشفى الحلة التعليمي ، مستشفى مرجان ، مستشفى الإمام الصادق) ، في مستشفيات كركوك (مستشفى كركوك العام ، مستشفى آزادي التعليمي) وكذلك مستشفيات مدينة الطب في بغداد (الحروق التخصصية ، الشهيد غازي الحريري ، مركز بغداد التعليمي ، والمركز الوطني للمختبرات التعليمية ومستشفى ابن البيطار) وقد كانت العينات من كلا الجنسين باختلاف الأعمار. تم جمع العينات خلال الفترة من تموز 2022 إلى تشرين الأول 2022. تم تحديد 36 من اصل 194 عزلة (18.5٪) برمز (PsA1 إلى PsA36) على أنها الزوائف الزنجارية باستخدام الصفات المظهرية وتم زراعتها على الاوساط (أجار الدم ، أجارماكونكي ، سترومايد أجار وكروموجينك اجار ) ، الخصائص المجهرية ، والاختبارات الكيميائية الحيوية ، بينما 111 لوحظ أن (57.2٪) من العينات لديها نمو بكتيري آخر و 47 (24.3٪) لا يوجد بها نمو بكتيري (غير معروفة). تم استخلاص الحمض النووي من عزلات الزوائف الزنجارية باستخدام مجموعة صغيرة لاستخلاص DNA الجينومي البكتيرية وقياس نقائها باستخدام( nanodrop (1.8-2 نانومتر. تم تأكيد التعرف على P. aeruginosa باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) باستخدام 16SrRNA ، وأظهرت النتيجة أن جميع العزلات الـ 36/36 100٪ كانت من عزلات P. aeruginosa تم إجراء اختبار الحساسية للمضادات الحيوية ضد 17 نوعًا من المضادات الحيوية ، وذلك باستخدام طريقة انتشار القرص وفقًا لمعهد المعايير السريرية للبكتيريا المسببة للأمراض في المختبر السريري ، CLSI,2023. أظهرت النتائج أن جميع العزلات الـ 36 كانت شديدة المقاومة 100٪ للتيكارسيلين والبيبراسيلين ، السيفتازيديم 88.9٪ سيفيبيم 50٪ ، أزتريونام 58.3٪ سيبروفلوكساسين 41.6٪، الليفوفلوكساسين 36.1٪ ، الإيميبينيم 52.7٪ ، ميروبينيم 41.7٪ ، توبراميسين 83.3٪ جنتاميسين 66.7٪ ، أميكاسين 83.3٪ ، نورفلوكساسين 38.9٪ ، بيبيراسيلين-تازوباكتام 41.7٪ ، دوريبينيم 38.9٪ ، كولستين 8.3٪ وبوليميكسين ب 8،3٪ . تم إجراء فحص إنزيم ESBLs β-lactamase ممتد الطيف بواسطة اختبار Double Disc Synergy DDS على وسط استنبات صلب (Muller Hinton agar) في طبق بتري. تم استخدام طريقة القرص المركب بناءً على التأثير المثبط لحمض clavulanic وفقًا إلى (CLSI, 2023).أظهرت النتائج أن عزلات Pseudomonas aeruginosa كانت موجبة بنسبة 4/36(11.1%) العزلات هي (PsA32, PsA33, PsA34 و PsA36) . تم استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل لفحص 10 جينات للطيف الموسع (β-lactamase (ESBLs في عزلات P. aeruginosa باستخدام مادة أولية محددة لكل جين من bla OXA-10 و bla OXA-488 و bla OXA-145 و blaOXA-181 و PER-1 و VEB و PER و Ges-2 و GES. بعد إجراء الرحلان الكهربائي ، أظهرت النتائج أن P. aeruginosa تحتوي على bla OXA-145 34/36 (94.44%) PER-1 31/36 (86.1%) , bla OXA-10 30/36 (83.33%) ، bla OXA-488 24/36 (66.6%) ، blaOXA-181 21/36 (58.3%)) ، ولا توجد نتيجة لثلاثة برايمر كانت PER و GES-2 و GES. أظهرت نتائج اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقيReal-Tim لـ VEB أن 33/36 (91.7٪) من عزلات P. aeruginosa كانت إيجابية. تم إرسال تحليل تسلسل الحمض النووي الجينومي الكامل لـ 15 عزلة (PsA1 إلى PsA15) من P. aeruginosa لـ 3 جينات (bla OXA-145 و bla OXA-488 و bla PER-1) إلى شركة Macrongen في كوريا ، التسلسلات غير الصحيحة تم قطعها وتقديم التسلسلات الصحيحة لـ NCBI BLASTN للتشابه ، وأظهرت مطابقة عزلات الدراسة الحالية مع سلالات الزوائف الزنجارية العالمية لبنك NCBI-Gen نسبة التشابه بين العزلات الحالية تتراوح من (81٪ - 98٪). في الختام ، عند دراسة العينات ، كانت الجروح هي أكثر مواقع عزل مقاومة الأدوية المتعددة (MDR) 19/36 % 52.8 P. aeruginosa تليها الحروق مختلفة ، وكان جين bla OXA-145 هو الجين الأكثر شيوعًا بين هذه العزلات ، يليه VEB ، PER-1 وجين bla OXA-10 و bla OXA-488 وجين blaOXA-181 .